人工角膜载体的体外构建及生物相容性研究

目的 应用壳聚糖(chitosan,CS)和蚕丝蛋白(silk fibroin,SF)构建组织工程角膜基质,探讨不同比例的CS和SF共混膜的生物特性,为以后的角膜移植奠定基础.方法 将SF和CS按体积比31和41混合,体外构建具有相应器官特征的角膜基质层;体外培养原代兔角膜基质及上皮细胞,检测细胞分布情况和载体膜片的物理特性;免疫组织化学法测定细胞表型和分布情况,CCK-8试剂盒测定载体膜片毒性,电镜下观察细胞结构形态和附着情况,将构建的膜片植入兔板层角膜中检测组织生物相容性.结果 载体膜片的吸水率均在90％左右,明显强于天然角膜,抗拉力SF/CS 31组为0.90±0.02,SF/CS 41组为1.30±0.05,透光率均大于60％,且抗拉力和透光率随着CS含量增加而增强,但与天然角膜组织间仍存在差异.与载体膜片共培养的细胞在培养2周后,电镜下可见膜片上形成致密的细胞层,重构的板层角膜结构与天然角膜相似.CCK-8法检测结果显示,合成膜无明显毒性.免疫组织化学染色结果显示,培养出的基质细胞形态与天然角膜相似.动物板层移植术后,裂隙灯观察载体膜片组术后半个月内充血消失,无明显的前房炎症反应,术后1个月拆线时无明显新生血管.免疫组织化学法检测术后病理组织未发现CD4+、CD8+、CD31+T细胞浸润.结论 CS-SF可以用于组织工程角膜基质的构建,这为重建角膜基质提供了方向.