大鼠视盘筛板星形胶质细胞的培养纯化及鉴定

目的 探讨大鼠视盘筛板部位原代星形胶质细胞体外分离纯化培养方法.方法 在解剖显微镜下分离成年大鼠视盘及其后一小段视神经,切块后放入含DMEM/F-12培养瓶中进行原代培养.经2.5g·L-1胰蛋白酶消化、星形胶质细胞选择性培养基纯化,传代2次后,用胶质细胞标志性抗体胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)、神经元细胞黏附分子(neural cell adhesion molecule,NCAM)和波形蛋白(Vimentin)进行免疫荧光化学染色;证实为星形胶质细胞后,用表皮生长因子刺激星形胶质细胞24h,观察其形态变化并用Westem blot法检测培养细胞GAFP、NCAM和Vimentin蛋白的表达情况.结果 组织块贴壁后10 d左右,细胞开始爬出,且形态各异.经星形胶质细胞选择性培养基纯化后,细胞形态多呈星形或不规则形,胞质丰富;免疫荧光化学染色显示GFAP、NCAM、Vimentin蛋白染色阳性,阳性细胞率达90％以上;表皮生长因子刺激后,细胞增生,形状发生改变,且与空白对照组相比,刺激后GAFP、Vimentin和NCAM蛋白表达增加,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).结论 本方法可在体外培养并获得纯度较高的大鼠视盘筛板部位的原代星形胶质细胞.