丹酚酸A(Sal A)对H2O2诱导的氧化应激损伤人晶状体上皮细胞增殖、凋亡、超微结构及炎症反应的作用

目的 探讨丹酚酸A(salvianolic acid A,Sal A)对H2O2诱导的氧化应激损伤人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cells,HLEC)增殖、凋亡、超微结构及炎症反应的作用.方法 将HLEC SRA01/04细胞传代培养后,用不同浓度(50 μmol·L-1、100 μmol·L-1、200 μmol·L-1、400μmol·L-1、800 μmol·L-)H2O2处理培养24 h,通过MTT法检测细胞存活率,筛选H2O2最佳作用浓度,作为细胞模型组使用浓度.对照组细胞用正常完全培养液培养.Sal A干预组将细胞先在含50 μmol·L-1 Sal A培养液中预孵育24 h,后加入最佳作用浓度H2O2继续培养24 h.而后采用MTT法检测各组细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡率,电镜观察细胞超微结构,Westem blot检测各组细胞炎症相关蛋白IL-1β、IL-18、TNF-α的表达情况.结果 MTT法检测结果显示不同浓度H2 O2(50 μmol·L-1、100 μmol·L-1、200μmol·L-1、400 μmol · L-1、800 μmol·L-1)处理组细胞存活率分别为61.26％±3.35％、47.81％±2.63％、29.53％±2.54％、21.47％±2.26％、14.97％±1.82％,各浓度处理组细胞存活率和对照组相比,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).其中,100 μmol·L-1H2O2处理组细胞存活率最接近半数致死量,故选择100 μmol·L-1 H2O2作为氧化应激损伤模型浓度用于后续实验.Sal A干预组细胞存活率为82.54％±3.07％,比100μmol·L-1 H2O2模型组明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05).流式细胞术检测结果显示,对照组细胞凋亡率为4.06％±0.41％,H2O2模型组细胞凋亡率为20.52％±3.29％,Sal A干预组细胞凋亡率为12.35％±1.48％,H2O2模型组和Sal A干预组细胞凋亡率差异有统计学意义(P＜0.05).电镜观察结果显示H2 O2诱导产生了明显的细胞超微结构损伤,线粒体、内质网数目减少,分泌颗粒减少,胞核体积缩小,可见少数细胞核内异染色质增多甚至聚集成块状.Sal A预处理后,细胞损伤的超微结构出现一定程度改善,如细胞形态较规则,细胞器线粒体、内质网数目增多,空泡数量减少,染色质分布基本均匀.Westem blot检测结果显示,H2O2引起的氧化损伤会显著提高IL-1β、IL-18、TNF-α表达,Sal A可以在一定程度上降低IL-1β、IL-18、TNF-α的表达.结论 Sal A可以有效增加H2 O2诱导的氧化应激损伤HLEC的增殖,抑制细胞凋亡,减小细胞超微结构损伤性改变,降低IL-1β、IL-18、TNF-α表达.