Brn3b基因对视神经损伤条件下视网膜神经节细胞的保护作用

目的 探讨Brn3b过表达对视神经损伤条件下视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)的保护作用.方法 选取雄性健康成年BALB/c小鼠60只,用微型视神经夹将小鼠右眼球后视神经夹持损伤,按视神经损伤后的天数依次分为第1、3、5、7、14天组,小鼠左侧正常眼作为空白组,明确视神经损伤天数条件.选取雄性健康成年BALB/c小鼠40只,用微量进样器以小鼠右眼玻璃体内注射的方法将腺相关病毒载体转染小鼠视网膜,建立Bm3b过表达模型并分组:Brn3b过表达组[转染Brn3b过表达腺相关病毒载体(Brn3b overexpressed adeno-associated viral vector,AAV-CMV-Brn3b)]和阴性对照组[转染空白腺相关病毒载体(blank adeno-associated viral vector,AAV-CMV-GFP)阴性对照物],每组20只;之后,取Brn3b过表达组和阴性对照组各10只,用微型视神经夹将小鼠右眼球后视神经夹持损伤,构建模拟小鼠视神经损伤(controlled optic nerve crush,CONC)模型并分组:CONC-Brn3b过表达组和CONC-阴性对照组.利用视网膜铺片和切片免疫荧光标记相关蛋白表达量,检测Brn3b过表达对视神经损伤条件下RGCs、Brn3b和Caspase3蛋白表达的影响,并对其共定位情况做出统计分析.结果 与阴性对照组相比,Brn3b过表达组小鼠视网膜Bm3b的表达水平明显增加.在小鼠CONC模型制作后的第7天RGCs的总凋亡数量达到65％,第14天RGCs的凋亡数量未见进一步改变.免疫荧光标记的蛋白表达量及其共定位分析显示,在视神经损伤条件下,与CONC-阴性对照组相比,CONC-Brn3b过表达组小鼠RGCs的凋亡量以及凋亡因子Caspase3的表达量均明显减少,差异均有统计学意义(均为P＜0.001).结论 Brn3b基因对视神经损伤条件下RGC具有明确的保护作用,Brn3b基因对凋亡因子Caspase3的表达可能具有一定的抑制作用.