缺氧、氧化应激对视网膜色素上皮细胞增殖及葡萄糖调节蛋白78表达的影响

目的 观察缺氧、氧化应激对体外培养的视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞增殖的影响及GRP78表达的变化.方法 体外培养人RPE细胞,采用CoCl2诱发细胞缺氧模型、H2O2诱发氧化应激模型.实验分为量-效关系组:细胞分别经浓度为100 μmol·L-1、200 μmol·L-1、400 μmol·L-1、800 μmol·L-的CoCl2、H2O2作用12h,用MTT法检测细胞增殖情况;时-效关系组:在CoCl2浓度为200 μmol·L-1、H2O2浓度为400 μmol·L-1的基础上,分别选取药物作用8h、12 h、16h3个时间点收集细胞,采用免疫细胞化学染色检测GRP78蛋白的表达情况.结果 量-效关系组:不同浓度CoCl2组RPE细胞活性与空白对照组相比均明显下降(均为P＜0.05);400 μmol·L-1及800 μmol·L-1H2O2组细胞存活率较空白对照组均明显下降(均为P＜0.05).时-效关系组:空白对照组GRP78表达阳性细胞率为(5.4±3.0)％;CoCl2作用8h、12 h、16 hGRP78阳性细胞率分别为(34.2±7.1)％、(54.4±9.1)％、(34.7±6.8)％;H2O2作用8h、12 h、16 h GRP78阳性细胞率分别为(37.8±7.1)％、(57.4±5.1)％、(42.5±3.9)％.经统计学分析,CoCl2、H2O2处理8h后,RPE细胞中GRP78表达均较空白对照组明显升高(均为P＜0.01),作用12h时GRP78的表达量最高,作用16 h时GRP78的表达量又有下降.结论 GRP78可以作为RPE细胞缺氧、氧化应激的生化标志物,GRP78的表达变化与细胞应激状态有一定依赖关系.