BHMT对同型半胱氨酸诱导的人晶状体上皮细胞氧化损伤的保护作用

目的:观察甜菜碱高半胱氨酸甲基转移酶(BHMT)在同型半胱氨酸(Hcy)环境下对人晶状体上皮细胞(HLEC)的保护作用.方法:构建BHMT基因过表达慢病毒载体,将体外培养的HLEC随机分为3组:正常组:正常培养的HLEC;对照组:感染了空载体的HLEC-B3,BHMT过表达组(OE):感染了过表达BHMT基因载体的HLEC-B3,均培养于10％FBS(胎牛血清)培养基+5mmol/L Hcy培养液中.应用EdU(5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷)试剂盒检测细胞的增殖能力,流式细胞仪检测活性氧(ROS)含量,可见分光光度计测算谷胱甘肽(GSH)活性,Western blotting检测内质网应激相关蛋白(GPR78,Nrf2)及凋亡相关酶Caspase-12的表达.结果:BHMT过表达组较对照组细胞增殖能力增长约30.0％(P<0.05).ROS检测显示,正常组、对照组、过表达组荧光强度分别为(89.2043±0.3511)％、(91.4502±0.0606)％、(49.5625±0.4502)％,过表达组与正常组有差异(P<0.05);GSH活性检测显示:相比于正常组与对照组,BHMT高表达组GSH活性明显上升(P<0.05);Western blotting结果显示:GRP78的相对表达量在正常组及对照组中明显高于过表达组,Nrf2的相对表达量在正常组与对照组中明显低于过表达组.凋亡相关酶Caspase-12的相对表达量在过表达组中明显低于对照组.结论:BHMT可以抑制Hcy对HLEC的氧化损伤作用,降低ROS水平,升高GSH活性,减轻内质网应激反应,抑制细胞凋亡.BHMT对Hcy诱导的HLEC氧化损伤有重要的保护作用.