微小RNA-15a/16-1重组慢病毒对人鼻咽癌CNE-2Z细胞生物特性的影响

目的 探讨微小RNA(microRNA,rniR)-15a/16-1重组慢病毒对人鼻咽癌CNE-2Z细胞生物特性的影响,并探讨其可能机制.方法 重组慢病毒和空载体慢病毒转染CNE-2Z细胞后筛选绿色荧光蛋白阳性细胞,实时定量PCR (RT-qPCR)检测miR-15a、miR-16-1表达水平；将实验分为对照组、转染组、放射线照射组、转染联合放射线照射组,四甲基偶氮唑蓝法分析各组细胞增殖情况；流式细胞术检测各组细胞凋亡情况；克隆形成实验分析对照组和转染组对放射线敏感性的变化；RT-qPCR、Western blot法检测bcl-2 mRNA及其蛋白的表达水平；分光光度法检测Caspase-2、Caspase-3的活化程度.结果 转染组miR-15a、miR-16-1相对表达量((x)±s,下同)分别为524.80±40.79、466.11±40.96,同对照组比较,差异有统计学意义(t=494.611,t=386.840,P=0.000)；转染联合放射线照射组细胞增殖抑制最明显(F =424.255,P=0.000).对照组、转染组、放射线照射组及转染联合放射线照射组的细胞凋亡率分别为(2.2±1.4)％、(9.6±0.8)％、(2.9±1.1)％、(18.6±0.7)％,差异有统计学意义(F=158.519,P=0.000).转染组同等剂量下(2、4、6、8 Gy)存活分数、平均致死剂量(mean lethal dose,Do)、准阈剂量(quasi-threshold dose,Dq)均低于对照组.二者放射增强比(sensitization enhancement ratios,SER) (Do)、SER(Dq)分别为1.473、1.581.转染组、放射线照射组、转染联合放射线照射组bcl-2 mRNA表达相对量组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).转染联合放射线照射组bcl-2蛋白表达下降最明显,转染组次之；对照组、放射线照射组、转染组、转染联合放射线照射组的Caspase-2活化程度分别为0.12 ±0.01、0.24±0.04、0.35±0.02、0.44±0.04(F=115.500,P=0.000),Caspase-3的活化程度分别为0.13±0.01、0.27±0.01、0.43±0.02、0.83±0.06(F =439.921,P=0.000).结论 重组慢病毒LV-miR15a/16-1可提高CNE-2Z细胞中miR-15a、miR-16-1的表达水平,抑制CNE-2Z细胞的增殖；促进CNE-2Z细胞的凋亡,增强CNE-2Z细胞的放射线敏感性.其可能通过抑制CNE-2Z细胞中bcl-2蛋白的表达,促进Caspase-2、Caspase-3的活化以实现对鼻咽癌细胞CNE-2Z生物学特性的调控.