银杏叶提取物保护顺铂致小鼠HEI-OC1细胞损伤的作用及机制研究

目的 观察银杏叶提取物对顺铂诱导小鼠耳蜗毛细胞(HEI-OC1)中AMPK及SIRT1蛋白表达水平的影响,探讨银杏叶提取物抗损伤和凋亡作用的机制.方法 取对数生长期的HEI-OC1细胞,添加高糖DMEM培养基调整细胞密度到1×104/ml,将其加入6孔板中,每孔2 ml.将HEI-OC1细胞分为对照组、顺铂组、顺铂+银杏叶组,对照组HEI-OC1细胞仅采用DMEM培养基培养,顺铂组细胞中加入8μg/ml顺铂进行干预24小时,顺铂+银杏叶组预先给予HEI OC1细胞加入50 μg/ml银杏叶提取物作用24小时,再给予含有8μg/mL顺铂的DMEM培养基作用24小时;采用CCK-8试剂盒检测各组培养24、48、72和96 h时的增殖情况;采用Western blot检测三组细胞凋亡相关蛋白Caspase-3、BCL-2和Bax以及AMPK和SIRT1表达;采用流式细胞术检测三组细胞不同干预后的凋亡情况.结果 CCK-8结果显示,与对照组相比,顺铂组和顺铂+银杏叶提取物组HEI-OC1细胞的增殖能力均明显下降,在各个时间点均低于对照组(P＜0.05),而顺铂+银杏叶组的HEI-OC1细胞增殖能力在48、72和96 h时均显著高于顺铂组(均为P＜0.05),且在第72 h和96 h与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).流式细胞术检测显示对照组细胞凋亡率为2.3％±0.2％,显著低于顺铂组(26.8％±4.3％)及顺铂+银杏叶组(7.2％±1.5％)(P＜0.05).顺铂+银杏叶组HEI-OC1细胞的Bax及Caspase-3蛋白表达水平较顺铂组显著下降,而AMPK、SIRT1及Bcl-2蛋白表达水平较顺铂组显著升高.结论 银杏叶提取物能够通过AMPK/SIRT1信号通路途径抑制顺铂诱导的HEI OC1细胞的损伤与凋亡.