NELL2a在斑马鱼神经丘的表达及其突变才型构建

目的 利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建NELL2a基因突变模型,为探究NELL2a在非综合型听神经病谱系障碍(auditory neuropathy spectrum disorder,ANSD)发生发展中的作用奠定基础.方法 通过原位杂交技术,证实NELL2a基因在侧线神经丘表达,针对斑马鱼NELL2a基因,设计gRNA靶位点,体外合成gRNA和Cas9 RNA,在胚胎发育的单细胞期,通过显微注射的方法,将其注射入胚胎内.待仔鱼发育至一定时期,通过尾鳍鉴定,进而获得NELL2a F0代,后续通过F0代侧交,获得F1代杂合子,通过F1代自交获得F2代纯合子.通过听觉诱发电位(AEP)检测F2代纯合子的听力状态.结果 通过测序证明已经获得NELL2a (△GC)纯合子,Nell2a-/-斑马鱼在600、800、1 000和2 000 Hz声刺激频率的AEP阈值均显著高于野生型斑马鱼.结论 NELL2a表达于斑马鱼侧线神经丘,推测其对神经丘毛细胞的功能起着重要作用,具体机制有待进一步研究.