促红细胞生成素抑制氧化损伤诱导的人眼 Müller 细胞凋亡

目的：探讨促红细胞生成素（EPO）抑制氧化损伤导致的 Müller 凋亡的可能性及其分子机制。方法对培养的人眼 Müller 细胞系 MIO-M1细胞采用 BrdU 标记法和 MTT 比色法观察正常及过氧化氢（H2 O2）或葡萄糖氧化酶（GO）氧化损伤条件下0、0．01、0．1、1、10、30、100 U／mL EPO 作用24、48、72 h 后对 Müller 细胞增殖、迁移的影响；采用 MTT 比色法观察加 PI3K／PDK1／PKB（Akt）信号传导通路阻断剂 LY294002后 Müller 细胞增殖的变化；采用 ELISA 实验观察 Müller 细胞对 EPO 的表达和分泌；通过 Western-blotting 技术检测体外不同条件培养下EPO 对 ERK1／2及 Akt 信号传导通路的作用。结果正常培养条件下，EPO 有轻度促进 Müller 细胞增殖迁移的作用，但差异无统计学意义；正常培养条件下，Müller 细胞自身不分泌 EPO，0．4 mmol／L H2 O2致 Müller 细胞损伤80％时，其培养液内 EPO 的表达量为正常培养液下的1．42倍；氧化损伤状态下，0．08 mmol／L H2 O2或8 U／L GO作用 Müller 细胞24 h 后导致其半数死亡且 Akt 信号通路激活；提前2 h 加入外源性 EPO 后，发现30 U／mL EPO 对抗氧化所致 Müller 细胞的损伤作用最明显；同时提前2 h 加入 Akt 信号通路阻断剂 LY294002后，Akt 信号传导通路的保护作用被阻断减弱。结论EPO 对体外正常培养的 Müller 细胞不具有促进增殖迁移作用；正常培养条件下 Müller 细胞自身不表达并且不分泌 EPO，氧化损伤条件下 Müller 细胞自身可低分泌 EPO；加入外源性 EPO 后， EPO 可能通过 Akt 信号传导通路对 H2 O2损伤的 Müller 细胞发挥保护作用。