白色念珠菌烯醇化酶诱导产生中性粒细胞外网

目的 通过重组白色念珠菌烯醇化酶(enolase),研究其对人中性粒细胞的作用.方法 采用分子克隆法,构建质粒、克隆、表达、纯化白色念珠菌重组enolase,密度梯度离心法提取人中性粒细胞,通过2,7-二氯二氢荧光素二醋酸酯(DCFH-DA)法、Sytox green染色和免疫荧光观察白色念珠菌重组enolase(500 nmol/L)对人中性粒细胞的刺激作用.中性粒细胞加入白色念珠菌SC5314(中性粒细胞:白色念珠菌=5:1)作为阳性对照组(SC5314组),未加刺激的作为阴性对照组.采用单因素方差分析(One-Way ANOVA)及Tukey′s检验对数据进行统计分析.结果 成功得到重组enolase,分子量为46 kDa.重组enolase可以刺激人中性粒细胞产生细胞内活性氧(ROS), enolase组与SC5314组产生ROS的量均无明显差异.Sytox green对胞外DNA定量及免疫荧光观察,均显示重组enolase可以刺激人中性粒细胞产生中性粒细胞外网(NETs).NETs定量结果显示, enolase组[(11.0 ± 2.5)%]与SC5314组[(12.4 ± 2.0)%]在2 h时无明显差异(F=6.13,P=0.0886),在4 h时enolase组[(22.2 ± 2.0)%]显著低于SC5314组[(31.4 ± 3.1)%],差异有统计学意义(F=9.745, P=0.0370).结论 白色念珠菌enolase可以诱导人中性粒细胞形成NETs.