miR-338-3p过表达/抑制表达慢病毒载体的构建及感染效率评价

目的:构建miR-338-3p过表达/抑制表达慢病毒载体,并检测其感染效率.方法:由miRBase数据库查找获得miR-338-3p前体序列,设计目的基因片段并人工合成;将miR-338-3p前体序列分别和pLVX-ZsGreen-miRNA-Puro/pLVX-shRNA2-Puro载体进行双酶切反应后连接产生pLVX-ZsGreen-mmu-miR-338-Puro/pLVX-shRNA2-Puro-miR-338-3p inhibitor慢病毒表达载体,测序鉴定,筛选阳性克隆.并感染293T细胞,包装产生慢病毒并测定滴度.通过荧光显微镜及流式细胞仪检测过表达/抑制表达miR-338-3p慢病毒感染RAW264.7效率.结果:经过双酶切反应鉴定和测序证实,成功构建了miR-338-3p的慢病毒过表达/抑制表达载体pLVX-ZsGreen-mmu-miR-338-Puro/pLVX-shRNA2-Puro-miR-338-3p inhibitor,荧光显微镜下观察可见包装细胞293T表达绿色荧光.荧光显微镜及流式细胞检测技术提示,感染RAW264.7破骨细胞系可获得稳定且效率良好的转染.结论:成功构建了miR-338-3p过表达/抑制表达慢病毒载体,为进一步研究miR-338-3p在破骨细胞中的功能及作用机制提供了稳定的细胞转染载体.