组织蛋白酶B与血管内皮生长因子影响高氧诱导小鼠视网膜新生血管形成的实验研究

目的 探讨组织蛋白酶B(cathepsin B)与血管内皮生长因子(VEGF)在小鼠视网膜新生血管形成中的影响.方法 选用清洁级C57BL/6J小鼠共44只,7～8日龄,雌雄不限.应用随机数字表法将其分为正常对照组和高氧处理组.其中,正常对照组11只小鼠(22只眼),高氧处理组33只小鼠(66只眼).正常对照组小鼠在标准环境中生长;高氧处理组小鼠为建立视网膜新生血管动物模型,其环境除氧体积分数为(75±2)％,其他均相同,氧箱内饲养5 d后,将其返回到标准环境中.以视网膜表面出现新生血管簇、无灌注区,判定为造模成功.再应用随机数字表法将成模的小鼠随机分为模型对照组、实验对照组和实验组,每组11只小鼠(22只眼).正常对照组和模型对照组不予任何药物干预,实验对照组和实验组分别给予玻璃体腔注射二甲基亚砜和溶于二甲基亚砜的CA-074 Me(cathepsin B抑制剂),继而在标准环境中饲养5 d.采用心腔注射荧光素标记葡聚糖,视网膜铺片法观察新生血管生成的情况;分别采用实时聚合酶链反应法和蛋白质印迹法检测小鼠视网膜组织中cathepsin B、VEGF信使核糖核酸(mRNA)相对表达量及蛋白的表达量.所有数据均以均数±标准差((x)±s)表示.采用单因素方差分析比较各组总体差异,当差异有统计学意义时,再用SNK-q检验进行组间多重比较分析.结果 在荧光显微镜下,实验组较模型对照组和实验对照组视网膜血管走行相对清晰,未见明显的缺血无灌注区.各组cathepsin B与VEGF mRNA及蛋白的表达量总体存在差异,差异有统计学意义(F=25.23,22.98,43.86,67.92;P<0.05).模型对照组和实验对照组中cathepsin B与VEGF mRNA及蛋白的表达量均增高,而实验组中cathepsin B与VEGF的mRNA及蛋白的表达量则降低.实验组与正常对照组比较、实验对照组与模型对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05).结论 CA-074 Me可抑制cathepsin B和VEGF的mRNA及蛋白的表达.cathepsin B和VEGF表达减少可抑制小鼠视网膜新生血管的形成,且cathepsin B与VEGF之间可能存在着双向调节的关系.