外源性重组Wnt3a蛋白对大鼠牙囊细胞成骨分化的影响

目的:研究外源性重组Wnt3a蛋白对大鼠牙囊细胞(DFCs)成骨/成牙骨质向分化的影响.方法:酶消化组织块法获取大鼠DFCs,用ALP活性检测法分别观察5、10、25、50、100 ng/mL重组Wnt3a蛋白刺激DFCs 9 d后对其ALP活性影响的浓度效应,以及100 ng/mL重组Wnt3a蛋白作用于DFCs 3、6、9、13 d后对其ALP活性影响的时间效应;用Western blot法检测100 ng/mL重组Wnt3a蛋白作用于DFCs 2、4d后,对细胞中成骨/成牙骨质向分化相关蛋白RUNX2、OCN、Ⅰ-胶原蛋白及β-连环蛋白(β-catenin)表达水平的影响.结果:100 ng/mL重组Wnt3a蛋白作用于DFCs 3、6、9、13 d后,各时间细胞ALP活性均较对照组有所升高,其中以6、9d时升高最明显(P＜0.05);实验组细胞的ALP活性随重组Wnt3a蛋白作用时间延长而逐渐增加,各时间点两两相比,除9d与13 d相比无统计学差异(P＞0.05)外,其他各时间点均有统计学差异(P＜0.05).Western blot检测结果显示,100 ng/mL重组Wnt3a蛋白刺激DFCs 2、4d后,均可使细胞中RUNX2、OCN、Ⅰ-型胶原蛋白、β-catenin的表达水平增加(P＜0.05).结论:重组Wnt3a蛋白可能通过Wnt/β-catenin信号途径促进大鼠DFSc成骨/成牙骨质向分化.