小鼠窦前卵泡二维体外培养法的优化研究

目的 优化小鼠窦前卵泡二维体外培养体系,探讨卵泡刺激素(FSH)对小鼠窦前卵泡体外发育的影响.方法 将分离自14 d雌鼠的初级卵泡(80～100μm)和早期次级卵泡(110～130μm)分别培养在浓度为10、100 mU/ml r-FSH的培养液中,观察并记录卵泡体外生长情况和卵母细胞的成熟情况;检测并分析第10天窦卵泡的空间生长情况及不同培养液中卵泡的雌二醇(E2)分泌水平;Western blotting检测卵泡中FSH受体(FSHR)、类固醇激素合成限速酶3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD)、17α-羟化酶(CYP17)及芳香化酶(CYP19)的表达水平.结果 初级卵泡在10、100 mU/ml r-FSH培养液中的成腔率(0.00％±0.00％,36.14％±4.02％)及卵母细胞成熟率(0.00％±0.00％,23.54％±7.62％)明显低于早期次级卵泡成腔率(78.63％±4.13％,92.74％±2.54％)及卵母细胞成熟率(48.55％±3.73％,80.88％±4.02％),差异有统计学意义(P<0.05);在100 mU/ml r-FSH培养液中的早期次级卵泡成腔率(92.74％±2.54％)、卵母细胞成熟率(80.88％±4.02％)明显高于在10 mU/ml r-FSH培养液中的卵泡成腔率(78.63％±4.13％)及成熟率(48.55％±3.73％),差异有统计学意义(P<0.05);早期次级卵泡在10 mU/ml r-FSH的培养液中呈平铺式生长模式,而在100 mU/ml r-FSH培养液中呈立体空间生长模式,后者更接近于体内卵泡的生长模式;早期次级卵泡中FSHR的相对表达水平明显高于初级卵泡(1.86±0.32 vs.1.19±0.28,t=4.94,P<0.05).100 mU/ml r-FSH培养液中早期次级卵泡组卵泡3b-HSD、CYP17及CYP19的表达以及E2的分泌水平明显高于用10 mU/ml r-FSH培养液培养时.结论 FSH不仅会影响窦前卵泡的体外发育率,还会改变窦前卵泡的体外发育模式.选择早期次级卵泡培养在含100 mU/ml r-FSH的二维培养液中培养可获得理想的卵泡发育率及发育模式.