微环DNA载体介导的shRNA在HBV转基因小鼠中的抗病毒作用

目的 探讨微环DNA载体介导的shRNA对HBV转基因小鼠体内乙肝病毒复制及表达的抑制效应.方法 采用分子克隆技术制备靶向HBV基因的shRNA通用质粒pU6-shRNA HBV和微环shRNA质粒pMC-U6-shRNA HBV.将HBV转基因小鼠随机分为微环shRNA组、通用质粒shRNA组和无关质粒对照组,利用水动力转染技术分别导入pMC-U6-shRNA HBV、pU6-shRNA HBV及对照载体pU6-control.于转染后第1、7、14、21、28、35天,分别采用Real-time PCR及化学发光微粒子免疫分析法(CMIA)检测转基因小鼠血清HBV DNA及HBsAg水平,免疫组化染色观察转基因小鼠肝脏HBcAg的表达.结果 质粒注射后第7～21天,pU6-shRNA HBV及pMC-U6-shRNA HBV对转基因小鼠血清HBsAg 的表达及HBV DNA的复制均有明显抑制作用,与pU6-control相比差异有统计学意义(P＜0.05);21d后pU6-shRNA HBV组血清HBsAg及HBV DNA均有所回升,至第35天基本回复至对照水平;至注射后35d,pMC-U6-shRNA HBV依然保持较强的体内抑制作用,与其他两组比较差异有统计学意义(P＜0.05).免疫组化结果显示,与pU6-shRNA HBV组相比,pMC-U6-shRNA HBV组小鼠肝组织内HBcAg阳性细胞数明显减少.结论 与pU6-shRNA HBV质粒相比,微环shRNA质粒pMC-U6-shRNA HBV对HBV转基因小鼠体内乙肝病毒的抑制作用持续时间更长久.采用微环DNA作为shRNA的体内递送载体与普通的质粒载体相比具有一定优势.