B型肉毒毒素单克隆抗体的制备和鉴定

目的 利用杂交瘤技术筛选抗B型肉毒毒素(BoNT/B)的鼠源单克隆抗体(mAb).方法 以BoNT/BHc蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,取小鼠脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,筛选阳性细胞株经有限稀释法克隆化后,采用腹水诱生的方法制备抗体,通过亚型鉴定、SDS-PAGE、Western印迹以及非竞争ELISA等方法对抗体进行鉴定.结果 5只BALB/c小鼠免疫后尾血效价均达到1:64000,取其中效价最高的5号鼠制备杂交瘤,筛选到9株阳性细胞,经鉴定抗体重链有IgG1和IgG2b两种亚型,轻链均为κ型.腹水制备的1E9-H2抗体纯度>96％,以线性表位与抗原BoNT/BHc特异性结合,亲和力常数为6.7×10-9 mol/L.结论 筛选到1株高亲和力鼠源单克隆抗体,为BoNT/B中和抗体研发及检测方法建立提供了选择.