成纤维细胞生长因子FGF13A的亚细胞定位研究

目的 探究成纤维细胞生长因子FGF13A蛋白的亚细胞定位并确定其核仁定位信号(NoLS).方法 利用丙氨酸替换FGF13A蛋白中可能的核仁定位信号中的氨基酸,将各突变体与绿色荧光蛋白(GFP)融合表达;各融合蛋白表达质粒转染人胚肾细胞系HEK-293细胞和人膀胱癌细胞系5637细胞;转染48 h后通过激光共聚焦显微镜观察细胞内绿色荧光的分布确定融合蛋白的亚细胞定位.结果 FGF13A-EGFP蛋白定位于细胞核仁,FGF13B-EGFP蛋白定位于胞质;FGF13A蛋白N端的62个氨基酸是其核仁定位的关键序列;FGF13A蛋白的55 KKRRRRR61为其核仁定位信号的核心序列,将55 KKRRRRR61突变为55 AAAAAAA61后,FGF13A蛋白失去其核仁定位能力,而只突变其中单个(M1:55 KKARRRR61)或部分(M2:55 AARRRRR61、M3:55 KKAARRR61和M4:55 KKRRAAA61)氨基酸,并不影响FGF13A的核仁定位.结论 成纤维细胞生长因子FGF13A定位于细胞核仁,其核仁定位信号位于蛋白N端,核心序列为55 KKRRRRR61.这一发现为进一步研究FGF13A的生物学功能奠定了基础.