肝癌细胞上皮-间质转换模型的建立与差异性表达微小RNA分子的高通量筛选

目的 拟利用转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人肝癌细胞发生上皮-间质转换(epithelial-mesenchymal transition,EMT),建立EMT模型.方法 在低血清培养条件下,用TGF-β1处理肝癌细胞2～6d,观察细胞形态变化,采用Western印迹检测EMT典型标志物的表达变化,流式细胞术检测肝癌肿瘤干细胞标志物CD13和EpCAM的表达变化,并利用微小RNA芯片技术(miRNA chip)筛选和分析TGF-β1处理前后差异表达的miRNA.结果 经10 ng/ml TGF-β1诱导2～6d后,多数细胞形态由上皮样转变为成纤维样,细胞间隙明显增大;Western印迹定量分析结果显示,10 ng/ml TGF-β1处理后,肝癌细胞E-钙黏蛋白(cadherin)表达水平显著性下调;流式细胞术结果显示,CD13和EpCAM显著性上调;对miRNA芯片结果分析得到35种差异表达比较显著的miRNA,经过生物信息学分析,这些差异表达的miRNA在转录调控中发挥了重要作用.结论 在低血清培养条件下,用10 ng/ml TGF-β1处理肝癌细胞2～6d,细胞发生明显的EMT过程,利用该法可成功建立肝细胞癌的体外EMT细胞模型,在此模型中,可对差异表达的miRNA进行筛选分析和进一步的功能研究.