MERS冠状病毒核衣壳蛋白原核表达和纯化

目的 构建带有MERS-CoV N( MERS冠状病毒核衣壳蛋白)基因片段的pET-22b+原核表达载体,并表达和纯化核衣壳蛋白( NP). 方法 通过PCR技术扩增NP蛋白基因片段,插入到原核表达载体pET-22b+上. 使用核酸电泳、测序以及小量诱导表达确认所构建克隆的正确性,然后将重组质粒转化进大肠杆菌BL21a(DE3)中,并在大肠杆菌BL21a(DE3)中大规模诱导表达NP蛋白,使用AKTA纯化系统经强阳离子交换层析纯化出NP蛋白.结果 测序和小量诱导结果表明,扩增的NP蛋白片段序列正确,所构建的pET-22b+-NP克隆可在大肠杆菌BL21a (DE3)的包涵体和细胞质中表达;通过阳离子交换层析和浓缩后,蛋白的纯度和浓度都得到明显提高. 结论纯化出高纯度、高浓度的NP蛋白,为NP蛋白功能性研究提供重要基础.