9种WADA禁用生长激素释放肽和生长激素促分泌素的HPLC-MS/MS检测及尿中稳定性研究

目的:选取世界反兴奋剂机构(WADA)禁用的7种生长激素释放肽(GHRP-1,GHRP-2,GHRP-4,GHRP-5,GHRP-6,Hexarelin和Alexamorelin)和2种生长激素促分泌素(Anamorelin和Ipamorelin)为研究对象,建立人尿中的HPLC-MS/MS检测方法,进行稳定性实验.方法:使用Oasis(R)WCX固相提取小柱(1cc,30rmg)对尿样进行化学前处理,尿样加入内标后离心,取1mL加入小柱,依次用5％ NH4OH和20％ CH3CN清洗后,用含2％甲酸的水/乙腈(1/3)洗脱液洗脱,35℃氮气流下吹干,复溶后进样于LC-MS/MS.使用1290/6470液相色谱质谱仪和Zorbax 300SB-C18色谱柱进行定性分析,流动相采用含0.2％甲酸的水/乙腈体系.结果:检测限根据不同物质分布在0.01～0.5 ng/mL(S/N＞3).回收率分布在40％～76％之间,日内精密度和日间精密度均小于15％,尿中基质无明显干扰.室温,冷藏条件储存和反复冻融对Anamorelin、GHRP-2、GHRP-4和GHRP-5有明显影响.结论:建立了尿中9种生长激素释放肽和生长激素促分泌素的HPLC-MS/MS检测方法,方法简单,特异性、灵敏度均可满足WADA实验室国际标准和技术文件要求.现已应用于我实验室的常规检测.尿样在传送、检测及实验室长期保存过程中应尽量避免反复冻融.