Notch3过表达对心肌成纤维细胞向肌成纤维细胞转化的抑制作用

目的:探讨Notch3过表达对心肌成纤维细胞(CFs)向肌成纤维细胞(MFs)转化的作用.方法:用胶原酶消化法分离培养SD仔鼠的CFs,将CFs于10 ng/ml转化生长因子-β1(TGF-β1)中孵育24 h,用羟脯氨酸试剂盒检测细胞上清羟脯氨酸含量,免疫荧光法检测CFs中平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达,用Western-blotting检测Notch3蛋白表达;利用慢病毒转染CFs,使其过表达Notch3,确定最佳转染条件为感染复数(MOI)20,转染时间72 h,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白(GFP)表达,Western-blotting检测Notch3过表达效率;用羟脯氨酸试剂盒检测细胞上清羟脯氨酸含量,免疫荧光法检测CFs中α-SMA表达.结果:10 ng/ml TGF-β1可显著诱导CFs细胞上清羟脯氨酸含量及α-SMA表达增加,同时使Notch3表达下降,与空白对照组相比有统计学差异(P＜0.05).慢病毒转染CFs过表达Notch3后,与空白对照组相比,Notch3过表达组细胞上清羟脯氨酸含量及α-SMA表达均显著减少(P＜0.05).结论:过表达Notch3能抑制CFs向MFs转化.