PD-1诱导肝纤维化大鼠枯否细胞M0 向M1/M2分化的时相研究

目的 探讨肝纤维化进展过程中程序性死亡受体1(programmed cell death protein 1,PD-1)蛋白对静态枯否细胞(Kupffer cell,KCs)M0亚群向活化的KCs M1、M2亚群分化的时相.方法 随机数字表法将40只SD大鼠分为对照组(16只)和模型组(24只).模型组以40％ 四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)/60％花生油1.0 ml/kg每周一、周三皮下注射造模,连续8周;对照组在对应时间皮下注射花生油1.0 ml/kg.于1周、2周、4周、8周后处死大鼠,每次每组4只.①制作大鼠肝脏马松染色(Masson)切片,判断造模情况.②取出大鼠肝脏,分离培养KCs,流式细胞仪分选各期KCs M0、M1、M2期细胞并检测其所占比例.免疫荧光法检测流式细胞仪分离的各期KCs M0、M1、M2各亚群PD-1蛋白的表达.结果 ①肝纤维化模型制备成功,呈进行性加重趋势;M0亚群比例进行性下降.肝纤维化早期(1～2周)M1亚群比M2亚群高,第四周达到高峰,然后下降;M2亚群早期增加较慢,但持续增加,到后期(8周)时显著高于M1亚群.②免疫荧光结果表明,与对照组比较,M0亚群PD-1蛋白第二周下降(P<0.05),第四周以后显著升高(P<0.05);M1亚群PD-1蛋白进行性下降,M2亚群PD-1蛋白进行性上升.结论 在肝纤维化早期,由于M0亚群PD-1蛋白含量较低且表达减少,与M1 PD-1蛋白减少相一致,有利于M0向M1分化.中后期随着M0亚群PD-1蛋白表达升高,与M1亚群PD-1蛋白表达持续降低相反,而与M2亚群PD-1蛋白持续升高一致,导致M0向M1的分化开始下降,向M2分化持续上升.在PD-1蛋白的分化作用调节下,M0亚群有步骤地向着M1和M2方向分化,参与肝的纤维化.