小鼠microRNA-135a与STAT6靶点作用的体外研究

目的 结合TargetScan软件预测,体外验证小鼠microRNA-135a(miR-135a)与信号传导及转录激活因子6(signal transducer and activator of transcription 6,STAT6)的靶点结合作用.方法 将聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增的靶基因STAT6的非编码3'UTR和突变基因分别克隆到双荧光素酶报告载体中,构建野生型和突变型载体.分别将miR-135a模拟物、模拟对照物与靶基因野生型、突变型质粒载体共转染体外培养的293T细胞,测定载体的校正荧光hluc值及报告荧光hRluc值.结果 与模拟对照物相比较,miR-135a模拟物与靶基因STAT6的3'UTR野生型质粒的相互作用能明显降低hRluc/hluc的相对荧光比值,差异有统计学意义(P＜0.01);而miR-135a模拟物与突变型质粒相作用则对hRluc/hluc的相对荧光比值比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 小鼠miR-135a与STAT6的3'UTR体外特异性结合作用,为进一步探讨小鼠miR-135a对变应性鼻炎的免疫调控机制提供了依据.