热应激对巨噬细胞NLRP3炎性小体及IL-1β产量调控的研究

目的 分析热应激对巨噬细胞产生白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)的影响,以及巨噬细胞内核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide-binding oligomerization domain receptor protein 3,NLRP3)炎性小体在该过程中的作用,并探讨NLRP3炎性小体在热应激引起的炎症反应中的作用.方法 应用酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)检测热应激对巨噬细胞细胞培养液中IL-1β的浓度的影响,应用Western blot检测热应激对巨噬细胞内NLPR3表达和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1(cysteinyl aspartate specific proteases-1,caspase-1)活化的影响,应用吸光度法检测试剂盒检测热应激对巨噬细胞内caspase-1活性的影响,应用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)技术检测热应激对巨噬细胞内IL-1β mRNA转录的影响,应用siRNA干扰NLRP3表达和化学抑制剂Z-WEHD-FMK抑制caspase-1活化检测热应激对IL-1β产生影响与NLRP3炎性小体的相关性.结果 热应激明显使骨髓细胞诱导来源的巨噬细胞中NLRP3表达量和IL-1β胞内mRNA含量和分泌量增加,caspase-1的活性也明显增加.经靶向NLRP3的siRNA或caspase-1抑制剂Z-WEHD-FMK处理后,热应激对巨噬细胞IL-1β的分泌量和胞中IL-1β转录水平的影响明显下降.结论 热应激能够增加巨噬细胞中NLRP3炎性小体的产生,并通过该类炎性小体增加巨噬细胞IL-1β的产量.