LC-MS/MS测定血液全基因组DNA甲基化及其在糖尿病神经病变患者体内的应用

目的 建立液相色谱-串联色谱法同时测定5-甲基胞嘧啶(5-mCyt)和胞嘧啶(Cyt)的浓度,初步探索糖尿病神经病变(DPN)患者全基因组DNA甲基化水平.方法 糖尿病神经病变患者血液样品经HiPure Blood DNA Kits试剂盒提取DNA,酸水解DNA形成单个核酸,采用LC-MS/MS法定量测定核酸含量.测定条件色谱柱为WATERS Xterra(R) RP18(4.6 mm× 100mm,3.5 μm),流动相为甲醇-水梯度洗脱,电喷雾离子源正离子检测,三重四极杆质谱仪进行多反应监测模式.考察该方法的标准曲线、精密度、基质效应、稳定性.结果 5-mCyt和Cyt水溶液在1～500 ng·mL-1浓度范围内线性关系良好,批内、批间精密度均在15％以内,相对偏差在±15％,样本于-80℃放置2个月稳定性良好.临床预试验中,中度和重度DPN患者的DNA甲基化率为(4.0±1.2)％,轻度DPN患者DNA甲基化率为(5.0±1.2)％.结论 本方法适用于血液样本中全基因组DNA甲基化的检测,DPN严重程度较重患者的DNA甲基化率较轻度DPN患者的甲基化率低.