阿帕替尼和5-氟尿嘧啶单药及联合对肠癌细胞系HT-29的促调亡作用

目的 观察阿帕替尼(Apatinib,Apa)和5-氟尿嘧啶(5-Fluorouracil,5-Fu)分别在单药、联合情况下对肠癌细胞系HT-29的增殖抑制及促凋亡作用,并研究其作用机制是否与信号通路磷脂酰肌醇3-激酶(phospholipid inositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)相关.方法 将细胞分为对照组(加入二甲基亚砜,dimethyl sulfoxide,DMSO)、阿帕替尼组(80μmol·L-1 Apa)、5-Fu组(100μmol·L-15-Fu),联合组(80μmol·L-1 Apa+100μmol·L-15-Fu).给药48 h后,用四甲基偶氮唑蓝(Methyl Thiazolyl Tetrazoli-um,MTT)法检测不同浓度Apa及5-Fu对细胞增殖的影响;用流式细胞术检测Apa及5-Fu对细胞凋亡的影响;用克隆形成实验检测Apa及5-Fu对细胞克隆形成能力的影响;用蛋白质印迹法(Western blot)检测Apa及5-Fu对PI3K、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(phosphorylated phospholipid inositol 3-kinase,p-PI3K)、Akt、磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B,p-Akt)蛋白表达的影响.结果 Apatinib 80μmol·L-1+5-Fu 100μmol·L-1联合组细胞增殖抑制率提高最显著,此时对照组、阿帕替尼组、5-Fu组和联合组细胞增殖抑制率分别为0％,(0.25±0.08)％,(0.40±0.04)％,(0.74±0.02)％;细胞凋亡率分 别 为(3.00±1.20)％,(41.60±2.15)％,(43.90±1.80)％,(56.10±1.50)％;细 胞 克 隆 数 分 别 为(88.33±3.06),(61.71±1.72),(57.75±4.21),(36.12±2.16)个.阿帕替尼组、5-Fu组、联合组的上述指标与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05),联合组的上述指标与阿帕替尼组、5-Fu组比较,差异均有统计学意义(P<0.05).对照组、阿帕替尼组、5-Fu组、联 合 组 细 胞p-Akt蛋 白 表 达 量 分 别 为1.05±0.10,0.10±0.01,0.80±0.08,0.11±0.01;p-PI3K蛋白表达量分别为0.92±0.06,0.61±0.10,1.01±0.11,0.80±0.05.阿帕替尼组、联合组的上述指标与对照组、5-Fu组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05).结论 Apa及5-Fu单药及联合均能以浓度依赖的方式抑制肠癌HT-29细胞系增殖.Apa可通过抑制PI3K/Akt的信号通路传导,诱导肠癌细胞凋亡.Apa联合5-Fu具有协同促进肠癌细胞凋亡的作用.