LC-MS/MS法同时测定比格犬血浆中甘精胰岛素及其代谢物浓度

目的 建立同时测定比格犬血浆中甘精胰岛素及其代谢物21A-甘氨酸胰岛素(M1)和21A-甘氨酸-脱-30B-苏氨酸胰岛素(M2)浓度的液质联用(LC-MS/MS)方法.方法 用乙酸-甲醇-乙腈溶液(2:50:50,v/v/v)沉淀血浆蛋白,上清液经固相萃取处理;以赖脯胰岛素为内标,用Grace Alltima HP C18(2.1 mm×50mm,5μm)色谱柱,流动相为10％甲醇水溶液-甲醇(含0.2％甲酸),梯度洗脱方式,柱温为50℃,流速为0.4 mL·min-1;用API4000质谱检测器,电喷雾离子源,正离子模式,多反应监测扫描方式测定样品中的待测物浓度.考察该定量方法的专属性、标准曲线与定量下限、精密度、准确度、提取回收率、稳定性及基质效应等.结果 甘精胰岛素及其代谢物M1和M2的线性范围均为0.3～10 ng·mL-1 (r2 ＞0.990 0),定量下限为0.3 ng·mL-1;批内及批间精密度(RSD％)均小于15％,准确度(RE％)均在±15％;提取回收率分别为41.88％ ～48.77％,31.08％ ～ 35.09％和28.95％ ～ 33.50％;样品反复冻融2次、室温放置2h、4℃放置76 h、-70℃放置65 d,稳定性均良好.结论 本方法快速、灵敏、准确、专属性好、稳定性佳,可用于同时测定血浆中甘精胰岛素及其代谢物的浓度.