恶性胶质瘤相关抗原表位肽激活的树突状细胞致敏的细胞毒性T淋巴细胞靶向治疗恶性胶质瘤的实验研究

目的 研究多种恶性胶质瘤相关抗原表位肽激活的树突状细胞(GDC)致敏的细胞毒性T淋巴细胞(GDC-CTL)对人脑胶质瘤细胞系U87的体外细胞毒活性,以及其对BALB/c nude裸小鼠神经胶质瘤模型的体内抗肿瘤作用.方法 制备多种恶性胶质瘤相关抗原致敏的GDC和GDC-CTL细胞,用流式细胞仪对细胞表型进行分析.设立不同的效靶比(5∶1,10∶1,20∶1),用CCK8法测定GDC-CTL细胞体外对U87细胞的杀伤率,用酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测GDC-CTL与U87细胞共培养48 h后培养上清液中γ干扰素(IFN-γ)水平,设立未经GDC激活的T淋巴细胞为对照组.用BALB/c Nude裸小鼠U87细胞皮下肿瘤模型观察GDC-CTL细胞体内抑瘤作用,实验分为空白对照组、模型组、静脉治疗组和局部治疗组,空白对照组于背部皮下注射0.9％ NaCl,其他3组于背部皮下注射1×107 U 87细胞,在肿瘤长径达3 mm后模型组于肿瘤局部注射0.9％ NaC1,静脉治疗组和局部治疗组分别于尾静脉和肿瘤局部注射2×107 GDC-CTL,每周注射3次,共2周,注射体积均为0.2 mL.观察4组小鼠的肿瘤体积生长情况,取肿瘤组织进行病理学检测.结果 GDC高表达CD83、CD1a和HLA-DR,表明成功诱导GDC成熟.CD3+T淋巴细胞比例为93.00％,CD3+ CD8+T淋巴细胞为69.00％,表明GDC-CTL成功激活.效靶比为5∶1,10∶1,20∶1时:GDC-CTL组和对照组对U87细胞的杀伤率分别为(24.35±1.12)％vs(15.21 ±0.91)％,(38.57 ±2.10)％ vs (23.35±1.30)％,(59.44±3.79)％ vs (35.23±2.33)％;GDC-CTL组和对照组与U87细胞共培养48 h后培养上清液中IFN-γ水平分别为(405.36±27.65)vs(371.11±23.23) pg·mL-1,(1509.22±97.16)vs(913.54±48.35)pg·mL-1,(2429.57±183.18) vs (1814.97±123.24) pg·mL-1,在效靶比为10∶1和20∶1时,2组间差异有统计学意义(P＜0.05).静脉治疗组和局部治疗组对BALB/c nude裸小鼠皮下神经胶质瘤的生长抑制率分别为34.83％和45.37％,与模型组的100.00％比较,差异均有统计学意义(P＜0.05),与模型组相比,局部治疗组和静脉治疗组均可见肿瘤细胞显著减少.结论 GDC-CTL是一种高效的免疫细胞,具有较强的体内外抑制胶质瘤生长的作用.