高效液相色谱-质谱联用法测定风湿免疫病患者口服低浓度甲氨蝶呤的血药浓度

目的 建立风湿免疫病患者服用甲氨蝶呤的液相色谱-质谱联用血药浓度测定方法.方法 采用甲醇沉淀蛋白,以氨基蝶呤作为内标,用Epic C18色谱柱(4.6 mm×50 mm,3μm),甲醇(含0.1％甲酸)-水(含0.1％甲酸)为流动相,梯度洗脱,流速0.6 mL· min-1,柱温40℃.用电喷雾离子化源,正离子模式,多反应监测(MRM)扫描方式进行监测.考察方法的专属性、标准曲线、定量下限、精密度、准确度、回收率、基质效应和稳定性.结果 甲氨蝶呤在0.5～200.0ng·mL-1范围内线性良好(r=0.999 2),定量下限为0.5ng·mL-1,日内、日间精密度及准确度RSD＜ 15％,回收率为76.80％～85.49％.结论 该检测方法快速、灵敏,满足对服用甲氨蝶呤72 h内的风湿免疫病患者血药浓度的准确测定.