LC-MS/MS法测定抑郁症患者晨尿中9种氨基酸类内源性物质的浓度

目的:建立测定人体尿液中5-羟基吲哚乙酸、谷氨酰胺、马尿酸、庚二酸、脯氨酸、酪氨酸、色氨酸、酪胺、缬氨酸浓度的方法.方法:采集抑郁症患者的晨尿,加入内标可的松,以乙腈处理后取上清液进行浓缩,采用液相色谱-质谱串联法(LC-MS/MS)进行分析.色谱柱为XTerra RP18;流动相A相为0.1％乙酸-水,流动相B相为0.1％乙酸-乙腈(梯度洗脱);柱温为40℃;流速为0.45 mL/min;采用电喷雾离子源(ESI),以多反应监测方式(MRM)进行定量分析,5-羟基吲哚乙酸、谷氨酰胺、马尿酸、庚二酸、脯氨酸、酪氨酸、色氨酸、酪胺、缬氨酸和内标可的松在正离子模式下定量分析离子对分别为质荷比(m/z)192.2→146.1、147.2→130.0、180.1→105.1、161.1→125.2、116.1→70.2、205.2→188.2、138.2→121.1、182.0→123.0、118.2→72.1、361.2→163.0.结果:5-羟基吲哚乙酸、谷氨酰胺、缬氨酸、庚二酸、脯氨酸、酪胺的检测质量浓度范围为10.00～3200 ng/mL(r=0.9938～0.9989,n=6),定量下限为10 ng/mL;色氨酸、酪氨酸、马尿酸的检测质量浓度范围为1600～51200 ng/mL(r=0.9992～0.9997,n=6),定量下限为1600 ng/mL,准确度试验结果为86.29％～98.65％(n=6),日内、日间精密度试验的RSD均不高于14.65％(n=6),基质效应的CV为6.18％～14.37％(n=6),提取回收率为86.21％～98.14％(n=6),稳定性试验的RE均<14.71％(n=3～6).结论:该方法灵敏、准确,可用于测定人体内上述9种物质的浓度.