草果总黄酮的大孔吸附树脂纯化工艺优化研究

目的:建立草果总黄酮的含量测定方法,并对其大孔吸附树脂纯化工艺进行优化.方法:采用高效液相色谱法测定草果中总黄酮的含量.色谱柱为Eclipse Plus C18,流动相为乙腈-1％醋酸水溶液(15:85,V/V),柱温为40℃,流速为0.8 mL/min,检测波长为256 nm,进样量为10μL.以吸附、解吸性能为考察指标,采用静态吸附和解吸试验对6种大孔吸附树脂进行筛选,采用静态吸附和解吸动力学试验考察吸附和解吸时间.在单因素试验的基础上,以总黄酮含量(以芦丁计)为评价指标,以上样液质量浓度、上样液pH、乙醇体积分数及洗脱用量为考察因素,采用正交设计优化草果总黄酮的纯化工艺并进行验证试验.结果:芦丁检测质量浓度的线性范围为0.028～0.281 mg/mL(r=0.9999);定量限为437.5 ng/mL,检测限为109.4 ng/mL;精密度、稳定性、重复性试验的RSD均小于2％,加样回收率为96.24％～99.75％(RSD<2％,n=6).HPD450型大孔吸附树脂对草果总黄酮的静态吸附和解吸综合能力最适中,最佳静态吸附与解吸时间均为12 h.最优纯化工艺为上样质量浓度1.8544 mg/mL,上样液pH 7,乙醇体积分数60％,乙醇洗脱用量8倍柱体积.验证试验显示,按最优工艺纯化后的草果总黄酮含量由纯化前的22.5567 mg/g上升至57.7282 mg/g,纯化倍数为2.56(n=3).结论:所建含量测定方法灵敏度高、稳定性好,优化的纯化工艺稳定、可行,可用于草果总黄酮的纯化.