miR-542-3p调控Rho基因对脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的 探讨microRNA-542-3p (miR-542-3p)靶向调控Rho基因对小鼠脑缺血再灌注损伤(CIRI)的保护作用.方法 将小鼠随机分为正常组、假手术组和模型组,构建CIRI模型(MCAO).用TUNEL染色检测3组小鼠海马组织中海马神经元的凋亡情况,用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western Blot)分别检测各组小鼠海马组织的miR-542 3p和Rho的mRNA和蛋白表达水平;分离提取3组小鼠海马神经元体外传代培养,选择第三代细胞分为:正常组、空白组、阴性对照组、miR-542-3p mimic组、miR-542-3p inhibitor组、siRNA-Rho组和miR-542-3p inhibitor+ siRNA-Rho组,双荧光素酶报告基因实验验证miR-542-3p和Rho的靶向关系,用qRT-PCR和Western Blot法分别检测各组细胞中miR-542-3p、Rho的mRNA和蛋白表达水平,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测各组细胞转染后的增殖能力变化情况,流式细胞术检测各组细胞转染后的凋亡情况.结果 与正常组相比,模型组小鼠海马组织中神经元凋亡情况明显增多,miR-542-3p mRNA表达明显降低,Rho mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P＜0.05).生物信息学网站和双荧光素酶报告基因证实,miR-542-3p能够靶向调控Rho基因.与空白组相比,miR-542-3p mimic组中miR-542-3p表达明显上升,miR-542-3p mimic组和siRNA-Rho组中Rho基因表达明显下调,增殖能力上升,凋亡率下降(P＜0.05);miR-542-3p inhibitor组中miR-542-3p表达明显降低,Rho基因表达明显上升,增殖能力下降,凋亡率上升(P＜0.05).结论 miR-542-3p可抑制Rho基因表达从而对CIRI的发病有保护作用.