鹿茸DNA检测试剂盒的研制与评价

目的 本实验对名贵中药材鹿茸的DNA指纹特征进行研究,从分子水平鉴定及分析鹿茸,研发鹿茸DNA检测试剂盒,并对其进行性能评价.方法 以鹿茸细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ (CoⅠ)和鹿茸线粒体细胞色素b(cytochrome b,Cyt b)为靶基因,采用生物信息学技术设计5对特异性引物,经实验筛选后确定细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ 1,即mt DNA Co Ⅰ 1(NC_013834.1)为特异性最好的引物,对鹿茸样品通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)进行扩增,优化PCR反应体系及反应条件,研发出鹿茸DNA检测试剂盒.对其性能进行评价,并对市售鹿茸样品进行检测.结果 使用鹿茸DNA检测试剂盒提取的DNA纯度均在1.785～1.906内,该试剂盒的特异性体现在检测正品时出现条带,而伪品无条带;灵敏度达3.125 ng·μL-1;反复冻融5、10、15、20次后仍有效用;重复检测正、伪品3次,结果均一致;-20℃保存,有效期可长达1年.对5个地区12个市售样品进行质量分析,合格率为66.67％.结论 研发的鹿茸DNA检测试剂盒特异性强、灵敏度高、稳定性及重复性均良好,操作简单,检测样品微量,适用范围广,成本低廉,结果准确,可为中药鹿茸提供一种科学、准确、可靠的鉴定方法.同时也表明市售鹿茸样品质量良莠不齐,混伪品大量充斥.