A30P突变体α-突触核蛋白表达体系的构建及其对蛋白质降解系统的影响

目的 研究A30P突变体α-突触核蛋白(α-synuclein,α-syn)对自噬溶酶体途径和泛素蛋白酶体系统的影响.方法 构建稳定表达A30P突变体α-syn的PC12细胞株,通过Western blot、RT-PCR等方法检测各组细胞中自噬相关蛋白LC3-Ⅱ和p62的含量变化,并观察细胞内泛素化蛋白的改变.最后,通过MTT法检测A30P突变体α-syn对正常和应激条件下细胞活力的影响.结果 成功构建稳定表达A30P突变体α-syn的PC12细胞株.过表达A30P突变体α-syn可降低自噬相关蛋白LC3-Ⅱ含量,提高自噬底物p62水平,并能促进泛素化蛋白质的聚集.此外,表达A30P突变体α-syn对细胞活力没有显著影响,但在血清剥夺或神经毒剂鱼藤酮刺激下,表达A30P突变体α-syn的细胞活力较空载体组显著降低.结论 过表达A30P突变体α-syn可导致蛋白质降解系统障碍,并提高细胞对外界刺激的敏感性.