普乐安片DNA条形码分子鉴定研究

建立基于DNA条形码技术的普乐安片处方成分鉴定方法.共收集8个厂家的16份普乐安片样品,分别采用植物和动物基因组DNA提取试剂盒提取样品DNA,所获DNA的ITS2序列扩增成功率均为100％,细胞色素C氧化酶亚基I (COI)序列扩增成功率分别为43.75％和56.25％.对于ITS2序列,12份样品可获得高质量测序峰图,鉴定结果为油菜Brassica campestris,4份样品存在较严重套峰,经克隆测序鉴定为油菜和黑芥B.nigra.对于COI序列通用引物获得的9份PCR产物,其中2份样品可直接进行PCR产物测序,鉴定结果为蚜虫类,7份样品经克隆测序获得82条序列,其中5份样品可检测到意大利蜜蜂Apis mellifera,7份样品均可检测到病原菌或病虫害.为解决COI通用引物因外源污染导致的蜜蜂源检测失败问题,新设计2对蜜蜂属Apis的COI引物,扩增效率均为43.75％,7份PCR产物直接测序的鉴定结果均为意大利蜜蜂A.mellifera.9份未检测到蜜蜂源的普乐安片来自同一厂家生产的3个不同批次,且每个批次含3份样品,推测原料花粉非蜜蜂采集所得.本研究基于ITS2和COI序列建立了普乐安片处方成分的鉴定方法,将为普乐安片的质量控制和市场监管提供科学依据和技术保障.