GLP-1类似物的体外活性及宿主杂质测定

胰高血糖素样多肽1 (glucagon-like peptide-1,GLP-1)通过提高细胞内环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)水平刺激胰岛β细胞分泌胰岛素.GLP-1受体(GLP-1 receptor, GLP-l R)是2型糖尿病药物研发的重要靶点,其激动剂也已成为新型抗高血糖药物.本研究基于稳定表达GLP-l受体的GLP-1R-GFP (green fluorescent protein)-HEK293A细胞,通过均相时间分辨荧光法建立了一套适合GLP-1类似物的体外活性检测方法.通过对细胞活性、细胞密度、是否避光等检测条件进行优化后,利用该方法检测了利拉鲁肽等4个GLP-1类似物刺激GLP-1R-GFP-HEK293A细胞后所产生的cAMP含量变化,通过cAMP量效曲线计算其半数有效剂量值(concentration for 50％ of maximal effect,EC50),对药物的体外活性进行评价.本研究还利用酶联免疫吸附实验和定量实时聚合酶链式反应实验分别测定了GLP-1类似物宿主细胞蛋白和宿主残留DNA含量,为高通量筛选GLP-1类似物提供了稳定、可靠和灵敏的体外活性分析和宿主杂质检测方法.