以nNOS和PSD-95相互作用为靶标的解耦联剂筛选模型的建立

复合物神经元型一氧化氮合酶(neuronal nitric oxide synthase,nNOS)-突触后密度蛋白-95 (postsynaptic density protein-95,PSD-95)形成的增加在缺血性脑卒中引发的神经损伤中起着重要作用,本研究以nNOS和PSD-95相互作用为靶点,建立nNOS-PSD-95解耦联剂筛选模型.模型采用转染的方式将质粒pCDH-Flag-nNOS和pcDNA3.1-PSD-95分别转染入人胚胎肾-293T (human embryonic kidney-293T,HEK-293T)细胞,通过真核表达的方式富集Flag-nNOS和PSD-95.随后,通过nNOS和PSD-95体外共孵育获得nNOS-PSD-95复合物,以ZL006为阳性药干预nNOS-PSD-95的结合,考察ZL006在该系统的解耦联效率,并对解耦联模型进行优化.结果 表明,在该模型中,ZL006显示出较明显的解耦联效果,并通过戊二醛法获得抗体耦联磁珠,从而优化筛选模型,提高了筛选效率,降低了成本.最后运用该模型对另一个已知的nNOS-PSD-95解耦联化合物IC87201及候选ZL006结构类似物进行了解耦联活性评价,发现IC87201在该模型中同样具有解耦联活性,并且在候选化合物中也筛选出了潜在的解耦联化合物.