IL-17信号通路抑制剂细胞筛选模型的优化及应用

本研究摸索及验证HEK-Blue-IL-17细胞模型的筛选条件,并应用该模型筛选抑制IL-17信号通路的化合物.按5x104个/孔的密度,将HEK-Blue-IL-17细胞接种在96孔培养板中,分别加入不同浓度的IL-17A或IL-17F和待筛选化合物培养16h,移取培养上清与QUANTI-Blue反应1或3h,在λ655nm处检测吸光度值.通过碱性磷酸酶(secreted alkaline phosphatase,SEAP)的生成量来反映该细胞模型中IL-17信号通路的活化状态.实验显示:IL-17A和IL-17F均可显著性地激活HEK-Blue IL-17细胞.IL-17A和IL-17F分别在10和100 ng·mL-1剂量下可产生较高的响应值.SEAP与QUANTI-Blue反应1h基本可达到终点反应.牛蒡子苷元(arctigenin)和表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate,EGCG)对IL-17A和IL-17F刺激的信号通路具有一定的抑制活性.本实验建立并优化了HEK-BlueIL-17细胞模型,可用于IL-17信号通路抑制剂的筛选.