烟碱通过N1受体促进热应激对RAW264.7细胞HSP70的诱导表达

目的:本研究探讨在巨噬细胞中,低剂量烟碱联合温和热应激对热休克因子1(heat shock factor 1,HSF1)和热休克蛋白70(heat shock proteins70,HSP70)表达的影响,并揭示其受体机制.方法:用低剂量烟碱(浓度1 mmol/L)联合温和热应激(39℃)刺激RAW264.7巨噬细胞,采用Western-blot观察HSP70的表达,免疫荧光细胞化学观察HSF1的入核,凝胶滞留实验(EMSA)观察HSF1与热休克元件(heat shock element,HSE)的结合;接着用不同的阻断剂预处理RAW264.7巨噬细胞,再给予烟碱和热应激刺激,观察HSP70的表达及HSF1的入核.结果:单纯低剂量烟碱(浓度1 mmol/L)刺激不能诱导HSP70的表达,但HSF1入核明显增多,HSF1与HSE的结合增强;在39℃时,再加入烟碱能增强HSP70的表达、HSF1的入核、HSF1与HSE的结合;六烃季铵预处理,HSF1的入核较单纯烟碱处理明显减少,且能明显阻断烟碱在39℃时诱导的HSP70表达的作用.结论:低剂量烟碱(浓度1 mmol/L)刺激可以促进HSF1入核并与HSE结合,但不能诱导HSP70的表达;烟碱通过N1受体诱导HSF1入核并促进温和热应激(39℃)对RAW264.7巨噬细胞中HSP70的诱导表达.