液质联用鉴定重组人1型单纯疱疹病毒载体的蛋白种类

目的:采用液质联用技术鉴定重组人1型单纯疱疹病毒载体中的蛋白种类.方法:用Triton X-100裂解病毒,用丙酮提取病毒蛋白;将病毒蛋白还原烷基化后用胰蛋白酶酶切,酶切肽段进行液质联用分析.色谱柱为C18(2.1 mm×150 mm,1.7 μm),以含0.1％甲酸的水溶液(A)-含0.1％甲酸的乙腈溶液(B)为流动相,梯度洗脱,流速0.3 mL· min-1.质谱仪采用正离子、高灵敏度、IDA模式采集数据,喷雾电压5.5kV,离子源温度550℃,扫描范围m/z 200～2 000;将采集的质谱数据导入到ProteinPilot软件中进行搜库检索,肽段与蛋白的可能性大于95％时可认为鉴定,人工对匹配的串联图谱进行确证,肽段及蛋白可接受的假阳性率(FDR)不高于1％.结果:在人单纯疱疹病毒蛋白数据库中检索,鉴定到29种人单纯疱疹病毒蛋白,大多为衣壳蛋白及包膜蛋白;在绿猴(Chlorocebus)属蛋白数据库中检索,鉴定到2种宿主细胞蛋白;在全病毒蛋白数据库中检索,鉴定到1种猫肉瘤病毒蛋白.结论:液质联用技术具有高灵敏度、高分辨率的特点,可用于基因治疗产品的质量研究.