抗PD-L1单抗的质量控制研究

目的:研究建立抗程序性死亡受体配体1(programmed cell death protein ligand 1,PD-L1)单抗的质量控制方法.方法:利用成像毛细管等电聚焦电泳(imaging capillary isoelectric focusing electrophoresis,iCIEF)、肽图对抗PD-L1单抗进行鉴别;利用还原/非还原十二烷基磺酸钠毛细管电泳(capillary electrophoresis-sodium dodecyl sulfonate,CE-SDS)、分子排阻高效液相色谱(size exclusion-high performance liquid chromatography,SEC-HPLC)、离子交换高效液相色谱(ion exchange-high performance liquid chromatography, IEC-HPLC)对抗PD-L1单抗的纯度进行控制;利用细胞结合抑制法和转基因细胞法测定抗PD-L1单抗的活性;利用光阻法和液流成像分析法对不溶性微粒进行检测和分析.结果:抗PD-L1单抗的iCIEF检测结果具有特征性主峰,肽图检测具有相应特征峰,起到很好的鉴别作用.还原CE-SDS的轻链与重链峰面积之和的百分比为(98.37±0.21)％,非还原CE-SDS主峰峰面积百分比为(96.33±0.15)％;SEC-HPLC单体的峰面积百分比为(99.43±0.02)％;IEC-HPLC酸性区峰面积百分比、主峰峰面积百分比、碱性区峰面积百分比分别为(13.63±0.40)％、(80.00±0.36)％、(6.37±0.15)％.细胞结合抑制法与转基因细胞法的活性检测均呈现剂量反应曲线,反映抗PD-L1单抗剂量依赖性地阻断程序性死亡受体1(programmed cell death protein 1,PD-1)与PD-L1的结合及后续的生物学效应.光阻法检测≥10μm及≥25 μm的不溶性微粒数分别为(1.33±0.58)粒·mL-1和(0.00±0.00)粒·mL-1;液流成像分析法检测2～10 μm、≥10μm及≥25 μm的微粒数分别为(1 243.67±242)粒·mL-1、(45.67±16.07)粒·mL-1和(10.00±5.00)粒·mL-1,其中,蛋白聚体占87.45％,非蛋白聚体占12.55％.结论:研究建立了抗PD-L1单抗的多种质控方法,为国内抗PD-L1单抗的质量检测提供了参考依据.