三维表皮模型Epikutis(R)参考品的研制

目的:考察体外重组三维(3D)表皮模型(Epikutis(R))作为标准物质及用于替代模型皮肤刺激性检测方法的可行性.方法:利用由人源性角质形成细胞构建的体外重组3D表皮模型(Epikutis(R))作为标准物质的原料,参照经济合作与发展组织439文件(OECD 439):替代模型皮肤刺激性检测方法,选择组织活力和屏障功能指标,考察表皮模型的均匀性和稳定性,并通过多实验协作测定对其组织活力和屏障指数进行分析.其中,组织活力测定采用MTT试验,以阴性对照光密度值作为组织活力指标;屏障功能测定采用1％TritonX-100作用不同时间后,测定半数活性时间,作为屏障指数(ET50).结果:Epikutis(R)表皮模型(每批100多个)的均匀性良好,其样品间均匀性不确定度为:ubb=0.013.短期稳定性(模拟保存运输条件下,运输箱内温度4～25℃放置24 h),组织活力(光密度,OD)为1.029,其短期稳定性不确定度为:us=0.018;ET50的平均值为(2.08±0.12)h,其短期稳定性不确定度us=0.159,无明显活性及屏障功能降低趋势.协作测定结果:OD为1.033.其检测不确定度为:uchar=0.036;最终的合成不确定度(含ubb、us和uchar)为0.043.ET50的协作标定结果为1.70 h;最终的合成不确定度为0.159.选择10种OECD 439提供的参考物质种类,进行皮肤刺激性试验,其结果与OECD439发布的刺激性判定结果一致,符合预期结果.结论:Epikutis(R)表皮模型的组织活力:1.033±0.086,最终定值范围为:0.9≤OD≤1.2;ED50:(1.70±0.32)h,最终定值范围为:1.4h≤ET50≤2.0 h.上述研究结果表明Epikutis(R)表皮皮肤模型满足OECD TG 439所推荐的替代模型皮肤刺激性检测方法的使用,可以用于化妆品、化学试剂、医疗器械等皮肤刺激性定性检测,也为纳米材料的透皮吸收及皮肤毒性研究提供了替代方法模型.