H7N9流感病毒血凝素在昆虫杆状病毒表达系统中的表达及抗血清的制备

目的:利用昆虫杆状病毒表达系统表达H7N9流感病毒血凝素(HA),以获得的重组血凝素(rHA1)蛋白免疫家兔制备抗rHA1血清,以用于单向免疫扩散(SRID)法检测H7N9流感病毒裂解疫苗HA含量.方法:构建含H7N9 HA1基因的重组杆状病毒,转染Sf9细胞表达rHA1蛋白.用rHA1蛋白免疫家兔获得抗rHA1血清.通过血凝抑制(HI)法和SRID法检测抗血清的HI效价、特异性和线性范围.结果:rHA1蛋白在昆虫杆状病毒表达系统中成功实现分泌表达,经纯化后纯度≥90％.不同剂量的rHA1蛋白免疫家兔后获得抗rHA1血清,HI效价分别为1 280和5 120.SRID试验中可与H7N9抗原国际参考品反应并产生沉淀环,10μg· mL-1到40μg· mL-1抗原浓度范围内沉淀环直径与抗原浓度线性正相关,R2大于0.99,与H1N1、H3N2和B型流感病毒无交叉反应.用该免疫血清和H7N9抗血清国际参考品分别检测H7N9流感病毒裂解疫苗HA含量,两者无显著性差异.结论:在大流感发生时,昆虫杆状病毒表达系统表达的rHA1蛋白可以用于制备SRID试验用免疫血清,以用于H7N9流感病毒裂解疫苗HA含量测定.