TIPE3长型及短型过表达细胞模型的构建及鉴定

目的:构建TIPE3长型及短型过表达慢病毒载体,转染MGC-803胃癌细胞株,筛选出稳定表达目的基因的细胞株并进行鉴定,为研究TIPE3长型及短型异构体对胃癌细胞生物学功能的影响提供重要的实验细胞模型.方法:检索NCBI基因库中人TIPE3长型及短型基因序列并设计相应引物,PCR扩增目的基因;将GV341载体和目的基因分别进行双酶切后重组,病毒包装后感染MGC-803胃癌细胞系,嘌呤霉素筛选得到稳定表达目的基因的细胞,RT-qPCR和Western blot分别从mRNA和蛋白水平对目的基因的过表达效果进行鉴定.结果:基因测序结果表明重组过表达慢病毒载体中Long TIPE3、Short TIPE3与NCBI中检索到的基因序列一致;倒置显微镜观察各组细胞形态基本一致,表明病毒转染并未影响细胞的生长;RT-qPCR和Western blot结果表明,以空病毒转染组为对照,Long TIPE3和Short TIPE3转染组中目的基因的mRNA和蛋白水平显著提高(P＜0.000 1).结论:TIPE3长型及短型过表达细胞模型构建成功,可以用来研究TIPE3长型及短型异构体对胃癌细胞生物学功能的影响.