液相色谱-串联质谱法同时测定对乙酰氨基酚及其相关代谢产物

目的:建立一种检测小鼠血浆中对乙酰氨基酚(APAP)及其5个代谢产物的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)方法,将之应用于对乙酰氨基酚的代谢研究.方法:血浆样品经甲醇沉淀蛋白后,以对氨基苯甲酸(PABA)为内标,采用LC-MS/MS法,C18色谱柱,流动相为甲醇-5 mmol·L-1乙酸铵水溶液(含0.1%甲酸)(55∶45),流速为0.5 ml·min-1,柱温为25℃,采用电喷雾离子化(ESI),正离子多反应监测(MRM)检测方式进行定量分析:APAP,-,m/z 152.0→110.0;APAP-cys,-,m/z 271.2→140.1;APAP-glut,-,m/z 457.0→328.0;APAP-NAC,-,m/z 313.4→208.0;APAP-sulf,-,m/z 232.4→152.1;APAP-gluc,-,m/z 328.2→152.1;IS,-,m/z 138.2→120.0.结果:在0.2~10 μg·ml-1(APAP)、1.0~20 μg·ml-1(APAP-gluc)、1.0~20 μg·ml-1(APAP-sulf)、1.0~20 μg·ml-1(APAP-glut)、0.4~15 μg·ml-1(APAP-NAC)和0.2~10 μg·ml-1(APAP-cys)范围内线性良好(r≥0.990 0).各测定物的日内精确度均在85%~115%间,精密度均小于15%,加样回收率均在85%~115%之间,RSD均低于15%.结论:该方法快速、灵敏、准确,适用于小鼠血浆中对乙酰氨基酚及其5个代谢产物的定量测定.