HPLC-MS/MS多组分检测结合化学计量学追踪附片液制备环节生物碱的传递规律

目的:追踪附片液制备过程中14个生物碱的传递规律.方法:采用Phenomenonex Gemini C18色谱柱(150mm×4.6mm,5μm),流动相为0.1％甲酸水溶液(A)-乙腈(B),质谱采用ESI+多反应监测(multiple reaction monitoring,MRM)模式扫描;建立HPLC-MS/MS方法同时测定附片液中乌头碱、新乌头碱、次乌头碱、印乌头碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、乌头原碱、尼奥林、附子灵、宋果灵、塔拉乌头胺、去甲乌药碱、去甲猪毛菜碱14个生物碱含量的检测方法;结合聚类分析、主成分分析追踪各种生物碱在附片液制备过程中8个环节的传递规律.结果:14个生物碱在各自浓度范围内线性关系良好(R2＞0.990 0),定量限为2.27 ～ 18.27 ng·mL-1,平均回收率94.81％ ～ 101.55％.分析表明,煎煮过程中各种生物碱大量溶出,剧毒的乌头碱、新乌头碱与印乌头碱全部水解完毕,次乌头碱含量亦水解降低了63.5％,大量单酯型生物碱转化生成,含量显著升高;浓缩环节各种生物碱均有不同程度损失,次乌头碱含量进一步降低至饮片总量的15.4％,去甲猪毛菜碱损失超过63.9％;通过2次醇沉精制环节,大量去除提取液中的淀粉、多糖等物质,而对各种生物碱含量影响不大.结论:附片液在制备过程中,毒性成分基本水解完毕,保证了制剂的安全性,但浓缩环节成分损失较大,应控制温度,改进工艺.该研究为附片液生产工艺的优化及品质提升提供了科学依据.