基于SPR系统的TMP-Fc免疫原性分析方法建立与应用

目的:利用Biacore 3000 GxP系统建立并验证基于表面等离子体共振(SPR)技术的免疫原性分析方法,对2种重组人促血小板生成素模拟肽-Fc融合蛋白(TMP-Fc)在食蟹猴体内的免疫原性(IM)进行比较研究.方法:采用食蟹猴连续皮下注射候选药LMF(L,100,300,1 000 μg·kg-1)或参照药romiplostim(R,300 μg·kg-1)后采集血清样品,用验证的IM分析方法检测样品中的抗药抗体(ADA).筛选阈值(CP)采用信噪比(S/N)进行计算;确证阈值(SCP)经免疫抑制试验确定;其他验证指标包括灵敏度、分析范围与Hook效应、药物耐受性与精密度.结果:候选药与参照药筛选阈值分别为CPL1.54和CPR1.41.确证阈值分别为SCPL37.6％和SCPR40.9％;配制于混合食蟹猴血清(PCMS)中的阳性质控(PC)浓度为1～64 μg·mL-1,参数模型拟合良好,未见Hook效应.二者方法灵敏度分别为556和463 ng·mL-1.药物耐受性数据表明样品S/N值随药物浓度升高而降低,其信号抑制比率(inhibition)反之升高.所有阴性质控(NC)、低浓度LPC与抗体血清rsPC样品变异系数(CV)均不高于25％.样品分析结果表明各给药组均有个体检出ADA,相同剂量下L和R的ADA阳性率均为50％;2种方法(anti-L,anti-R)对R的样品检测阳性个体及其检测时间点高度吻合.结论:本研究建立并验证了基于SPR系统的IM分析方法.方法符合生物制品IM研究要求,并成功应用于2种TMP-Fc生物样品的ADA检测.