应用RP-HPLC法检测重组猪干扰素α成品蛋白含量

目的:建立测定重组猪干扰素α成品中蛋白含量的反相高效液相色谱法(RP-HPLC),并进行验证.方法:应用RP-HPLC法测定重组猪干扰素α标准品及供试品的蛋白含量,并对方法的线性、精密度、稳定性、重复性进行验证.采用已建立的RP-HPLC检测方法测定7批重组猪干扰素α样品的蛋白含量,与Lowry法的检测结果进行比较.结果:重组猪干扰素α在6.1417～25 μg范围内,与峰面积呈现良好的线性关系(R2 =0.985 9).用所建立的方法测定同一标准品,进样6次,计算得到RSD(相对标准偏差)为1.7％;同一批样品进样12次,检测供试品的干扰素α蛋白含量,计算得到RSD为3.9％;同一批样品,取6份分别进样,检测供试品的干扰素α蛋白含量,计算得到RSD为0.9％.结论:建立了用RP-HPLC法测定重组猪干扰素α蛋白含量的方法.该方法简便、精密度、稳定性、重复性好,将蛋白分离成单一组分峰,紫外定量测定各峰吸光度,集定量与定性、纯度检验合一,定量范围可小于10μg,测定体积只需几微升,可用于重组猪干扰素α成品蛋白含量检测.