b型流感嗜血杆菌多糖活化度测定方法的建立及方法学验证

目的:建立b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae type b,Hib)多糖活化度的检测方法,并进行方法学验证.方法:采用铁氰化钾-三氯化铁-2,4,6-三吡啶基三嗪(tripyridyhriazine,TPTZ)法检测Hib多糖活化后的还原糖含量,对建立的方法进行专属性、线性、检测限、定量限、准确度及重复性验证.结果:该方法以葡萄糖浓度为标准,在10 ～ 70 μmol·L-1的范围内线性关系良好,R2=0.996 6;检测限和定量限分别为1.5和4.6 μmol·L-1;本方法在测定Hib活化多糖中还原糖含量时,将多糖浓度控制在0.5～1.0mg·mL-1,对还原糖测定干扰最低;重复性RSD =2.5％;平均加样回收率为107.8％,RSD=3.3％.结论:建立了铁氰化钾-三氯化铁-TPTZ法测定Hib多糖活化度,该方法准确、简便、可靠,对多糖结合疫苗的质量控制有重要意义.